消化時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )導致細胞膜蛋白的改變，最直觀(guān)的表現就是消化后第二天漂浮細胞很多或者貼壁慢。

建議二次消化。細胞與細胞間的連接沒(méi)有通過(guò)酶切開(kāi)的話(huà)，用移液槍進(jìn)行吹散后細胞會(huì )被撕裂，直接導致細胞不貼壁甚至死亡。

懸浮細胞聚團，要分情況進(jìn)行處理：

? 原本就是聚團生長(cháng)的細胞，不用干預，比如NK-92等就是聚團生長(cháng)；

? 如果是非聚團生長(cháng)的細胞，比如THP-1聚團了，要區分高密度和低密度。高密度可以輕輕吹散細胞后進(jìn)行低速離心，去除里面夾雜的死細胞，正常傳代即可改善；

? 非聚團生長(cháng)的細胞低密度時(shí)，聚團一般是細胞狀態(tài)不太好，需要調整狀態(tài)。排查是否有污染以及培養環(huán)境合不合適等問(wèn)題，對癥改善后細胞即可正常生長(cháng)，聚團改善；

? 剛復蘇的懸浮細胞也會(huì )出現聚團，一般是靜置培養和少動(dòng)，期間可以用補液和半換液的方式培養，等細胞密度長(cháng)起來(lái)，生長(cháng)至對數生長(cháng)期時(shí)，團塊問(wèn)題也會(huì )改善。

這個(gè)情況比較符合血清沉淀或者細胞碎片分泌物之類(lèi)的，一般不用過(guò)于關(guān)注，細胞能夠茁壯生長(cháng)就可以了。

如果是豬的肺組織提取的原代巨噬細胞，一般是終末分化的細胞，是不能增殖的，只能轉移到孔板做實(shí)驗。

一般要做分泌蛋白都是不建議加血清的。血清里面可能有一些蛋白類(lèi)未知成分，不排除會(huì )和實(shí)驗的目標蛋白有反應或者類(lèi)似，所以通常都是用的無(wú)血清。

原代組織分離后體外培養通常會(huì )有類(lèi)似的問(wèn)題，需要選擇合適的包被試劑進(jìn)行輔助貼壁，這是原代提取比較常見(jiàn)的操作。

首先是細胞消化后盡量成單顆，鋪板的時(shí)候需要練習下手法，不要有旋渦產(chǎn)生，導致分布不均勻；除開(kāi)鋪板手法外，細胞本身特性導致的容易聚團生長(cháng)，可以嘗試包被培養瓶以后低密度接種細胞，可能會(huì )達到比較好的單層貼壁的情況。

胰蛋白酶屬于酶制品，受溫度影響，反復的4℃- 37℃的溫度波動(dòng)反而會(huì )導致酶失活，效果不好，所以不建議37℃復溫。4℃拿出來(lái)可以直接用，加入到細胞消化的時(shí)候放進(jìn)培養箱就好了。

這種情況一般還是消化不充分導致，建議可以適當延長(cháng)消化時(shí)間，待細胞與細胞間的連接打開(kāi)后再進(jìn)行吹散，一般是很容易吹散的。